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    2016年ELISA試劑盒儀器質(zhì)控研究

    發(fā)布時(shí)間: 2016-12-21  點(diǎn)擊次數(shù): 1160次

    ELISA試劑盒為使儀器保持*工作狀態(tài)應(yīng)建立維護(hù)和校正儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP),所要控制的儀器包括移液器(加樣槍),水浴箱(溫箱),洗板機(jī)和酶標(biāo)儀。
    ◎移液器:ELISA加樣量?。?-100ul),其準(zhǔn)確性直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,利用稱重法檢查:吸取刻度指示量的水,萬(wàn)分之一天平稱重后計(jì)算吸量是否準(zhǔn)確,一般應(yīng)在±10%以內(nèi);
    ◎水浴箱 經(jīng)常檢查水浴箱溫度計(jì)所示的溫度和水中(或溫箱內(nèi))實(shí)測(cè)溫度是否一致,ELISA試劑盒允許有±1℃的誤差;
    ◎洗板機(jī) 每個(gè)廠家設(shè)置洗板后的殘留液有各自的規(guī)定一般不超過(guò)2ul ,人工扣板時(shí),墊紙不濕,定期檢查管孔是否堵塞;
    ◎酶標(biāo)儀 經(jīng)常維護(hù)其光學(xué)部分,防止濾光片霉變,ELISA試劑盒定期檢測(cè)校正,使其保持良好的工作性能。
    附1:ELISA試劑盒酶標(biāo)儀校正程序
    ◎?yàn)V光片波長(zhǎng)精度檢查:將不同波長(zhǎng)的濾光片從酶標(biāo)儀上卸下,用UV-2201型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(波長(zhǎng)精度±0.3nm)于可見(jiàn)光區(qū)對(duì)每個(gè)濾光片進(jìn)行掃描,其檢測(cè)值與標(biāo)定值之差為濾光片波長(zhǎng)精度。
    ◎通噵差與孔間差檢測(cè):通道差檢測(cè)是取一只酶標(biāo)板小孔杯(杯底須光滑,透明,無(wú)污染以酶標(biāo)板架作載體, ELISA試劑盒將其(內(nèi)含200ul甲基橙溶液吸光度調(diào)至0.500A左右)置于8個(gè)通道的相應(yīng)位置,蒸溜水調(diào)零,1于490nm處連續(xù)測(cè)三次,觀察其不同通道的檢測(cè)器測(cè)量結(jié)果的一致性,可用極差值來(lái)表示??组g差的測(cè)量是選擇同一廠家,同一批號(hào)酶標(biāo)2板條(8條共96孔)分別加入200ul甲基橙溶液(吸光度調(diào)至0.100A左右)先后置于同一通道,蒸溜水調(diào)零,于490nm處檢測(cè),其誤差大小用±1.96s衡量。
    n 零點(diǎn)飄移(穩(wěn)定性觀察):取8只小孔杯分別置于8個(gè)通道的相應(yīng)位置,均加入200ul蒸溜水并調(diào)零,于490nm處每隔30分鐘測(cè)一次,觀察各個(gè)通道4小時(shí)內(nèi)吸光度的變化。
    ◎精密度評(píng)價(jià):每個(gè)通道3只小杯分別加入200ul高中低3種不同.濃度的甲基橙溶解,蒸溜水調(diào)零,于490nm作雙份平行測(cè)定,每日測(cè)二次(上下午各一次),連續(xù)測(cè)定20天。分別計(jì)算其批內(nèi)精密度,日內(nèi)批精密度,日間精密度和總精密度及相應(yīng)的CV值。
    ◎線性測(cè)定:用電子天平稱取甲基橙配制5個(gè)系列的溶液,于490nm平行測(cè)8次,取其均值。計(jì)算其回歸方程,相關(guān)系數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)估計(jì)誤差s,并用±1.96s表示樣品測(cè)量的誤差范圍.ELISA試劑盒雙波長(zhǎng)測(cè)定評(píng)價(jià):取一分甲基橙溶液,分別加入3種不同濃度的溶血液(測(cè)定波長(zhǎng)為490nm,校正波長(zhǎng)為585nm),先后于8個(gè)通道檢測(cè),每個(gè)通道測(cè)3次,比較各組之間是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,以考察雙波長(zhǎng)消除干擾組分的效果。
    ELISA試劑盒一般酶標(biāo)儀無(wú)585nm濾光片,可選用550nm或630nm濾光片。450nm 濾光片的檢定選用普魯蘭溶液(校正波長(zhǎng)為630nm)。

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